蛋白质的保存是一个比较棘手的问题，分子生物学实验室的童鞋们或多或少都会碰到。 有没有遇到过，不同批次纯化的蛋白，采用同样的测试方法，活性却不太一样？ 有没有遇到过新纯化的蛋白，从冰箱拿出融化后，居然沉淀了？ 蛋白质纯化后，保存方式都有哪些呢？  

一、谨记蛋白质的保存原则 

低温、分装、浓缩、速冻／速融、添加剂  

二、保存方法你知多少 

蛋白质的的保存方法的选择*取决于蛋白质的稳定性以及保存后什么时候再次使用你的蛋白。 

1、如即提即用的话，可将浓缩蛋白质储存在单一溶液（如PBS），置于聚丙烯管或干净的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存。 
优点：蛋白容易获得，可以快速进行实验，且同一管样品可重复取样，这样避免了因经常解冻而加速蛋白的降解。  
缺点：可能会面临微生物污染，蛋白质失活和氧化，可能对实验数据的均一性造成影响。要避免这种情况，可以把蛋白质分成小份储存，并加入蛋白酶抑制剂、抗菌剂和还原剂等。但也要根据自己蛋白的情况，如果你的蛋白是完整的膜蛋白或分泌蛋白,很可能分子内存在二硫键，为保证其完整性，应该存储在氧化环境中。另外，储存时间超过一个月的蛋白可以考虑扔掉。  

2、透析到合适的缓冲液中可以冻干，放4°保存；也可加高浓度的硫酸铵（你的蛋白不沉淀的话），4°保存。 
注意：你要注意加入硫酸铵后pH会下降一些，你的缓冲液可不能太接近蛋白的等电点啊，蛋白在等电点附近沉淀很多时候是不可复溶，即使复溶活性也不能保证。  

3、纯化后的蛋白测浓度后，加入50%甘油，确认混匀后分装，液氮速冻，放入-20度或-80度保存，尤其适用于酶类。 
优点：在低温下，蛋白质对微生物污染，蛋白酶降解和氧化反应更有抵抗力，容易保证其活性。用甘油或乙二醇稀释使蛋白处于溶液中，可以方便取样。此外，这种方式储存的蛋白质可以保存长达一年，对于抗体轭合物是一个好的选择。  
缺点： 蛋白质在-20°溶液中仍有可能遭受水解、污染和氧化，如果蛋白对还原性环境要求比较高，也需加入抑制剂、还原剂等。而且将样品存放在50%冷冻保护剂中有时是不可取的，取决于你接下来要做的实验。  

4、有些蛋白可以不加甘油，直接液氮速冻几分钟，-80度保存。 
优点：可以长期保存（多年)，不需要甘油、叠dan化钠等化学物质，避免蛋白质降解或微生物污染。缺点：冷冻蛋白质应一次性使用，为了避免反复冻融发生降解。此外,抗体轭合物(特别是碱性磷酸酶复合物)冷冻后可能会失活。  

5、长期保存蛋白质的另一个方式是冻干（lyophilization）。 
优点：蛋白质冻干后会呈现蓬松的白色粉末形式，处于*脱水的状态，可以在冰箱中无限期保存。  
缺点：对于某些蛋白质，冻干操作有一个潜在问题就是蛋白质不能复溶。冻干／复溶的过程同样会对蛋白质产生一定的伤害作用。  

三、这些重点你要知道 

1、保证恒定的pH值，一般PBSzui为常用； 

2、保证一定的蛋白浓度，如果浓度比较稀的话，可以考虑添加一定量的BSA； 

3、甘油的添加也能在很大程度上提高抗体的稳定性； 

4. 为了防腐可以添加一定量的叠dan化钠（辣根过氧化物酶偶联的二抗一般不能加），如果样品要用于生物学检测，避免使用防腐剂。 

5、无论是冷冻还是储存在溶液中，将蛋白进行分装，以避免冻融，降低污染的风险。 

6、进行蛋白质操作实验时一定要带手套，们的皮肤上有一些蛋白酶，这些蛋白酶很可能会降解掉我们的蛋白样品。皮肤上的其他化学分子也可能会污染蛋白样品。另外，为了防止细菌的生长，蛋白质保存在灭菌的小管中。 

7、避免反复冻融或冻干重溶解过程，这样很可能会降低生物活性。 

8、避免震荡，震荡产生的剪切力有可能会对蛋白质产生破坏作用。震荡时溶液中会产生气泡，氧气的进入会导致蛋白质处在氧化环境中。蛋白质中含有半胱氨酸，其极易被氧化为胱氨酸，这一过程很可能会破环蛋白质的活性。