1 原  理 

本方法是通過(guò)將細(xì)菌污染于抗菌制品表面，然后用塑料薄膜覆蓋，使細(xì)菌與抗菌制品表面充分接觸，以測(cè)定其抗菌效果。適用于抗菌塑料、抗菌地板、抗菌瓷磚等產(chǎn)品的抗（抑）菌效果測(cè)定。

2 實(shí)驗(yàn)器材 

（1）實(shí)驗(yàn)菌株  金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、大腸桿菌（8099）、白色念珠菌（ATCC 10231），也可根據(jù)抑菌劑特定用途選用其他菌株

（2）磷酸鹽緩沖液 

（3）培養(yǎng)基  胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）與沙堡瓊脂培養(yǎng)基 

（4）薄膜 不影響細(xì)菌生長(zhǎng)和不吸水的材料，厚度不規(guī)定，使用一面應(yīng)有較好的粘合性，面積為 40mm±2mm的正方形   

（5）無(wú)菌塑料袋

（6）恒溫水浴箱

（7）37℃恒溫培養(yǎng)箱 

（8）樣片  將試樣及對(duì)照試樣（與試樣同質(zhì)不含抗菌組分）分別制成邊長(zhǎng)為 50mm±2mm的正方形，其中抗菌樣片3個(gè)，對(duì)照樣片6個(gè)。試驗(yàn)前，以脫脂棉蘸取酒精輕輕擦拭樣片 2～3次，充分干燥

3  操作程序 

（1）傾注瓊脂培養(yǎng)基平板。 

（2）將菌懸液用1/500的營(yíng)養(yǎng)肉湯稀釋成2.5×105cfu/mL～1.0×106cfu/mL實(shí)驗(yàn)用菌懸液。 

（3）將樣片試驗(yàn)面朝上放于無(wú)菌平皿中，取 0.4mL 菌懸液滴染于樣片中央，涂勻。按圖表示的方法用薄膜覆蓋，小心觸壓薄膜，使菌液均勻散開(kāi)，蓋上平皿蓋。如圖2-3 

（4）將裝有接種過(guò)菌液的試驗(yàn)樣片的平皿（3個(gè)抗菌樣片和3個(gè)對(duì)照樣片），置35℃±１℃，相對(duì)濕度不低于 90% 的條件下，培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24ｈ±１ｈ。

（5）洗脫  以無(wú)菌操作方式用鑷子將覆蓋膜和試驗(yàn)樣片放入塑料袋中，然后加入10mL 肉湯培養(yǎng)液，用手充分揉搓袋中的試驗(yàn)樣片和覆蓋薄膜，將細(xì)菌洗下。    

（6）吸取 1mL 洗下的菌液，至含 9mL PBS的試管中，做系列10倍稀釋?zhuān)∵m當(dāng)稀釋度接種２個(gè)平皿，以傾注法加入 15mL～20mL TSA，置 35℃±１℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng) 40h～48h。 

（7）將另 3 個(gè)對(duì)照樣片接種后立即用鑷子將覆蓋膜和試驗(yàn)樣片放入塑料袋中，洗脫和接種方法與試驗(yàn)樣片相同。 

（8）以試驗(yàn)用同批次稀釋液、培養(yǎng)基等分別設(shè)陰性對(duì)照。

（9）試驗(yàn)重復(fù)3次。

4 活菌數(shù)的計(jì)算  

Ｎ＝Ｃ×Ｄ×Ｖ 

Ｎ：為活菌數(shù) 

Ｃ：為2個(gè)平板的平均菌落數(shù)

Ｄ：為稀釋倍數(shù) 

Ｖ：為洗脫用肉湯培養(yǎng)基的液體的毫升數(shù) 

5 結(jié)果的計(jì)算與判定 

（1）試驗(yàn)成立應(yīng)符合的條件

1）各次試驗(yàn)陰性對(duì)照均無(wú)菌生長(zhǎng) 

2）對(duì)照樣片接種后直接求出活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值符合下列公式                    

（Lzui大值 - Lzui小值）/L平均值≤0.2  

公式中，Lzui大值   zui大活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值 

        Lzui小值   zui小活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值 

        L平均值   平均活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值 

3）對(duì)照樣片接種后的活菌數(shù)平均值應(yīng)為 1.0×105cfu/樣片～4.00×105cfu/樣片

4）覆蓋了薄膜的對(duì)照樣片培養(yǎng) 24h后的活菌數(shù)，每樣片均不少于 1.0×104cfu。 

（2）抗菌活性值的計(jì)算： 

                R=log（B/A）-log（C/A）=log（B/C）              

  R: 抗菌活性值 

  A: 對(duì)照樣片在接種后的活菌數(shù)的平均值 

  B：對(duì)照樣片在接種后培養(yǎng)24h的活菌數(shù)的平均值

  C：抗菌樣片在接種后培養(yǎng)24h的活菌數(shù)的平均值 

（3）評(píng)價(jià)規(guī)定 

各次試驗(yàn)抗菌活性值均≥2.0，判定該試樣具有抗菌作用。

6 注意事項(xiàng) 

（1）用薄膜覆蓋，小心觸壓薄膜，以免菌液溢出薄膜外。

（2）試驗(yàn)時(shí)應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，以防雜菌污染。