自動白細(xì)胞分類計數(shù)能減輕臨床實驗室的勞動強度。根據(jù)儀器預(yù)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)，在某種程度上可以替代需要專門技能和培訓(xùn)的檢驗人員，從而提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性。而且，儀器計數(shù)的細(xì)胞比傳統(tǒng)顯微鏡方法多許多倍，從而也提高了精密度。 

采用本標(biāo)準(zhǔn)所述的白細(xì)胞分類計數(shù)參考方法，對自動白細(xì)胞分類計數(shù)進(jìn)行性能評價。

C.1 性能評價內(nèi)容 

本標(biāo)準(zhǔn)所述參考方法適用于某種類型白細(xì)胞數(shù)量超過5%時的評價。如果細(xì)胞數(shù)量太低（如嗜堿性粒細(xì)胞），預(yù)期的變異系數(shù)就比較大。但是，在選擇特殊病例后，也可進(jìn)行精密度試驗。評價方案包括下列幾個部分： 

C.1.1 比較試驗，即與參考方法比較。 

C.1.2 精密度試驗，包括方法的短期和長期不精密度。 

C.1.3 建立參考范圍。由于同一樣本使用儀器法和參考方法得出的參考范圍可以相同，也可以不同，所以必須建立各自的參考范圍。 

C.1.4 臨床性能。采用已建立的參考范圍評價儀器對異常樣本檢出的能力。 
如果評價方案設(shè)計合理，只要采集200份樣本就能完成全部研究。其中，100份樣本取自健康人群，100份樣本必須符合表1的要求。實際工作中，可通過增加樣本數(shù)以涵蓋各種臨床情況。

C.2 樣本制備 

C.2.1 制片 

C.2.1.1 對于參考計數(shù)，按照參考方法，準(zhǔn)備樣本。 

C.2.1.2 對于儀器計數(shù)，按照廠商推薦的方法，準(zhǔn)備樣本。 

C.2.1.3 根據(jù)實驗室工作量隨機選擇樣本，包括健康個體和異常樣本。樣本類型應(yīng)滿足臨床性能研究要求，見表C.1。

C.2.2 標(biāo)簽 

每個樣本應(yīng)有*編碼，檢驗人員不得知道樣本來源。但應(yīng)做好記錄，以便能從樣本編碼中了解患者的病史。 

表 C.1 臨床性能研究的樣本類型 

臨床表現(xiàn)               白細(xì)胞計數(shù)特點         白細(xì)胞值（×109/L） 細(xì)胞百分率（％） 

急性炎癥              粒細(xì)胞增多和/或                  ≥9.0                   >80 

細(xì)菌感染               左移*（桿狀核）                 ≥0.9                   >6

慢性炎癥              單核細(xì)胞增多                     ≥0.8                   >10

寄生蟲感染，過敏反應(yīng)    嗜酸性粒細(xì)胞增多                ≥0.5                   >7

病毒感染              淋巴細(xì)胞增多和/或                ≥3.5                    >50 

傳染性單核細(xì)胞增多癥，

巨細(xì)胞病毒感染，       異型淋巴細(xì)胞*                    ≥0.7 

傳染性肝炎。  

再障，化療              粒細(xì)胞減少                      ≤1.5                   <10 

HIV感染                淋巴細(xì)胞減少                     ≤1.0                   <7

急性白血病              幼稚細(xì)胞*                       ≥0.1                   >2

嚴(yán)重貧血，骨髓病性貧血   有核紅細(xì)胞*                     ≥0.02                  >2

*表示在臨床性能研究中，每種病例至少應(yīng)包括5例

C.3 試驗操作 

C.3.1 參考方法必須由實驗室內(nèi)具備資格的檢驗人員操作。 

C.3.2 儀器必須事先校準(zhǔn)，每天進(jìn)行質(zhì)控測試，并保留校準(zhǔn)和質(zhì)控記錄。

C.3.3 每位患者取2份血液樣本分別用于參考方法和儀器法的測試。若評估圖像分析原理的儀器，應(yīng)按照廠商說明書要求制備血涂片和染色。若評價流式細(xì)胞術(shù)原理的儀器，按照廠商說明書要求運行儀器。

C.3.4 研究樣本應(yīng)統(tǒng)一標(biāo)記。如參考方法，血涂片標(biāo)記為A、B和備用；圖像分析方法，血涂片標(biāo)記為C,D和備用；流式細(xì)胞術(shù)方法，按照廠商說明書的要求。

C.3.5 保存樣本來源和全血細(xì)胞計數(shù)的結(jié)果記錄。

C.3.6 每天準(zhǔn)備每種方法所需要的樣本。 

C.3.7 用參考方法進(jìn)行分類計數(shù)時，每份患者樣本分析400個細(xì)胞，由兩位具備資格的檢驗人員，按照參考方法步驟，對每張血涂片分析200個細(xì)胞。其中，一位檢驗人員使用血涂片A，另一位檢驗人員使用血涂片B。記錄結(jié)果，數(shù)據(jù)必須表明每張血涂片編號和檢驗人員。

C.3.8 儀器法至少對200份樣本進(jìn)行雙份測定。每天樣本處理量不要超過研究總量的25％。測定細(xì)胞總數(shù)至少是400個，但不同儀器間實際計數(shù)量不同，流式細(xì)胞術(shù)原理的儀器通常檢測幾千個細(xì)胞。記錄測定的實際細(xì)胞數(shù)量。 

C.3.9 樣本應(yīng)覆蓋正常和異常全部計數(shù)范圍。為了便于統(tǒng)計分析，在儀器沒有將桿狀核作為獨立參數(shù)報告時，桿狀核計入中性粒細(xì)胞總數(shù)中。

C.4 數(shù)據(jù)采集 

C.4.1 采集不準(zhǔn)確度數(shù)據(jù) 

C.4.1.1 用參考方法計數(shù)時，使用玻片盒（或架）放置血涂片，采取隨機化模式排列，便于隨機分析。另一個盒子用于放置已完成檢驗的血涂片。由具備資格的檢驗人員使用參考方法得出參考值。每份樣本的每張血涂片（A或B）必須由一位檢驗人員檢驗，同一檢驗人員不得檢驗同一份樣本的第2張血涂片。

C.4.1.2 每份樣本的分類計數(shù)結(jié)果登記在數(shù)據(jù)匯總表上（表C.2）

C.4.1.3 保留儀器原始打印條和登記數(shù)據(jù)，并與參考方法記錄一一對應(yīng)。

C.4.1.4 記錄所有樣本白細(xì)胞總數(shù)，計算儀器法和參考方法的均值。

C.4.2 采集不精密度數(shù)據(jù)

C.4.2.1 采集短期不精密度數(shù)據(jù) 

C.4.2.1.1 短期不精密度是使用

C.2所述樣本，在同一批次中每份樣本測定兩次。

C.4.2.1.2 計算儀器法或參考方法的短期不精密度。匯總數(shù)據(jù)見表C.3。

C.4.2.2 采集長期不精密度數(shù)據(jù) 

C.4.2.2.1 長期不精密度是通過測定一段時間內(nèi)，每天使用質(zhì)控物在儀器上反復(fù)分析某種類型細(xì)胞，得出標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。質(zhì)控物通常由廠商提供。 

C.4.2.2.2 長期不精密度估計也可通過收集一段時間內(nèi)配對樣本的結(jié)果獲得。實驗室每周對4份樣本進(jìn)行雙份分析，然后，縱向比較周與周之間的結(jié)果，也能得出不精密度數(shù)據(jù)。匯總數(shù)據(jù)見表C.3。

C.5 臨床性能研究 

C.5.1 參考范圍的建立 
臨床驗證一種方法時需要依賴參考范圍。若儀器法和參考方法結(jié)果不*相同時，更需要建立每種方法的參考范圍。臨床性能判斷與參考范圍有關(guān)，而與儀器法和參考方法之間的偏倚無關(guān)。

C.5.1.1 健康個體 
研究中需要100名健康個體。本標(biāo)準(zhǔn)中，健康個體的定義為：

C.5.1.1.1 無已知影響白細(xì)胞分類計數(shù)的臨床疾病和臨床表現(xiàn)；

C.5.1.1.2 zui近無上呼吸道感染； 

C.5.1.1.3 全血細(xì)胞計數(shù)中其他成分如血紅蛋白，紅細(xì)胞壓積，紅細(xì)胞計數(shù)和白細(xì)胞計數(shù)應(yīng)在下列參考范圍內(nèi)（見表C.4）。 

C.5.1.1.4 實驗室工作人員、門診定期隨訪患者和經(jīng)選擇程序確認(rèn)的患者，符合上述標(biāo)準(zhǔn)的，可視為健康個體。也可采用獻(xiàn)血前的獻(xiàn)血員樣本。

C.5.2 臨床性能的試驗

C.5.2.1 試驗方法 
從臨床實驗室工作中選擇所有樣本，至少連續(xù)兩周，并考慮來自各種專科門診和住院患者的樣本。而且，對于儀器法來說，必須考慮實驗室會遇到的zui嚴(yán)重疾病，應(yīng)選擇特殊的異常病例（見表C.1）。樣本數(shù)量越大，結(jié)果的可靠性越大。

C.5.2.2 儀器報警系統(tǒng)的性能 

目的是顯示報警系統(tǒng)識別異常樣本的能力。采用相同樣本，比較儀器法和參考方法之間所有樣本的分類結(jié)果，若結(jié)果一致，表明報警系統(tǒng)有效。 

C.5.3 根據(jù)上述試驗結(jié)果，計算樣本的一致率、假陽性率和假陰性率。當(dāng)儀器法和參考方法結(jié)果不一致時，由仲裁者判斷結(jié)果。

C.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析 

C.6.1 方法學(xué)比較（不準(zhǔn)確度）

C.6.1.1 參考方法和儀器法 
儀器法的不準(zhǔn)確度是通過兩種方法比較來確定。目的是判斷計數(shù)結(jié)果的差異是否可以用儀器法和參考方法的不精密度來解釋，否則表明方法學(xué)之間存在真正差異。

C.6.1.2 2統(tǒng)計學(xué)分析

C.6.1.2.1 統(tǒng)計學(xué)假設(shè) 

C.6.1.2.1.1 參考方法代表真值，不一致性表示儀器法的不準(zhǔn)確度。

C.6.1.2.1.2 測試值（y）在已知參考值（x）下呈Gaussian分布。

C.6.1.2.1.3 每個樣本的y值均值與x值呈線性關(guān)系。 

C.6.1.2.1.4 通過觀察x-y散點圖上，每個樣本（i）的參考方法均值（xi）與儀器法均值（yi），作出滿意程度的判斷。通過計算儀器法和參考方法的不度，在散點圖上添加代表理論上95％可信區(qū)間的線條。若儀器法的數(shù)據(jù)點落在可信區(qū)間外側(cè)，必須檢查準(zhǔn)確度。

C.6.1.2.2 結(jié)果判斷

C.6.1.2.3 影響因素 

在分析中，考慮下列影響數(shù)據(jù)的因素： 

C.6.1.2.3.1 樣本間差異：生物學(xué)變異為可接受的樣本間差異。 

C.6.1.2.3.2 方法間固有偏倚：通過測量兩種方法之間每種類型細(xì)胞的均值差異，能得到方法間固有偏倚。 

C.6.1.2.3.3 非隨機干擾：已知（非隨機）干擾因素必須從研究數(shù)據(jù)中剔除。例如，剔除中性粒細(xì)胞Pelger-Huët異常的樣本，因為這類樣本使中性分葉核粒細(xì)胞減少，可使儀器法與參考方法之間結(jié)果不一致。但是，這類樣本在臨床性能研究中不能剔除。

C.6.2 不精密度 

C.6.2.1 短期不精密度 

短期不精密度是每種類型細(xì)胞作重復(fù)測定的差異。短期不精密度計算公式：

C.6.2.2 長期不精密度 

長期不精密度是用質(zhì)控物作連續(xù)重復(fù)測定。長期不精密度計算公式：

C.6.2.3 不精密度結(jié)果表達(dá) 

采用表C.3格式表達(dá)不精密度的試驗結(jié)果。

C.6.3 臨床性能研究

C.6.3.1 參考范圍 

C.6.3.1.1 根據(jù)所有原始數(shù)據(jù)，建立每種類型細(xì)胞的直方圖。觀察直方圖的界外值（界外值為超出均值3s的值）。 

C.6.3.1.2 核查界外值，排除謄寫錯誤。如果仍有界外值，剔除該樣本的全部數(shù)據(jù)。

C.6.3.1.3 從原始數(shù)據(jù)剔除界外值后，在余值直方圖上導(dǎo)出參考范圍。參考范圍定義為95%健康人群的結(jié)果。按照每種方法每種細(xì)胞類型列出參考范圍。

C.6.3.2 臨床性能研究 

C.6.3.2.1 比較每種細(xì)胞類型的儀器法均值和參考方法均值。 

C.6.3.2.2 根據(jù)儀器法和參考方法數(shù)據(jù)，將實驗結(jié)果分成正?；虍惓深?。異常病例按下列要求分成亞類：（1）分布異常：即中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞計數(shù)值超出參考范圍；（2）形態(tài)異常：即中性桿狀核粒細(xì)胞增加、異型淋巴細(xì)胞增加、出現(xiàn)幼稚細(xì)胞、出現(xiàn)有核紅細(xì)胞和其他異常細(xì)胞，可伴有或不伴有細(xì)胞的數(shù)量異常。 
同一患者可能同時存在分布異常和形態(tài)異常。儀器法不能分類的結(jié)果，不是分布異常，就是形態(tài)異常。 

C.6.3.2.3 制定所有結(jié)果不一致樣本的清單，進(jìn)行仲裁。

C.6.3.3 仲裁

C.6.3.3.1 原則 

仲裁是對儀器法和參考方法有分布或形態(tài)結(jié)果差異的樣本而言。仲裁者為具備資格的檢驗人員，通常具有專門技術(shù)和經(jīng)驗，并且在性能評價研究中，尚未參與任何參考分類計數(shù)工作。

C.6.3.3.2 仲裁方法 

C.6.3.3.2.1 對所有參考方法和儀器法不同的結(jié)果，核查制片是否良好，染色是否可接受，有無謄寫錯誤。 

C.6.3.3.2.2 對于形態(tài)不一致：

（1）判斷2張參考血涂片為何種異常，核查儀器法結(jié)果，確認(rèn)有無形態(tài)報警。

（2）如果有一位檢驗人員發(fā)現(xiàn)異常，瀏覽2張血涂片，確認(rèn)有無形態(tài)異常。 

（3）如果儀器法有形態(tài)異常報警，但是檢驗人員未發(fā)現(xiàn)形態(tài)異常，應(yīng)仔細(xì)瀏覽2張血涂片，確認(rèn)
2位檢驗人員有無漏報。 

C.6.3.3.2.3 對于分布不一致： 

（1）用參考方法對每份樣本進(jìn)行重新分析（若有可能，用儀器法進(jìn)行重新分析），觀察是否每次
分析雙份結(jié)果差異大于方法預(yù)期的不精密度。 

（2）如果參考方法結(jié)果的差異超出預(yù)期范圍，再進(jìn)行200個細(xì)胞分類計數(shù)，并與原始結(jié)果進(jìn)行比
較。如果仲裁者計數(shù)結(jié)果與2份原始結(jié)果之一符合，即在可信區(qū)間內(nèi)，但和另一位檢驗人員結(jié)果不一致，則采用仲裁者計數(shù)結(jié)果，重新評價臨床性能。若仲裁者計數(shù)在原始2份計數(shù)結(jié)果的中間，則用原始計數(shù)結(jié)果。 

（3）如果儀器法雙份測定結(jié)果之間的差異超出了預(yù)期范圍，核查該結(jié)果，確認(rèn)有無因樣本異常所
致的儀器故障，使分類計數(shù)結(jié)果無效。若儀器法為形態(tài)異常，應(yīng)從分布分類表中剔除該數(shù)據(jù)。 

C.6.3.3.3 修正 
用仲裁結(jié)論修正分布和形態(tài)分類表。

C.6.3.3.4 不一致性 

作為分類表的補充，準(zhǔn)備不一致結(jié)果的清單，包括樣本數(shù)和不一致原因（如“第63號樣本參考方法發(fā)現(xiàn)原始細(xì)胞，儀器法漏報”。）

C.6.3.4 判斷臨床準(zhǔn)確性 
根據(jù)分布和形態(tài)分類表，計算儀器法和參考方法之間的一致率，假陽性率和假陰性率。

分布和形態(tài)分類表 

16 
參考文獻(xiàn) 
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