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      流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)處理與分析
    • 發(fā)布日期:2018-05-29      瀏覽次數(shù):3204
      • 數(shù)據(jù)的顯示通常可分為一維單參數(shù)直方圖(histogramplot)、二維點(diǎn)圖(dotplot)、二維等高圖(contour)和假三維圖(pseudo3D)等。下面簡(jiǎn)述zui常用的單參數(shù)直方圖和二維點(diǎn)圖。

         

        1.  單參數(shù)直方圖單參數(shù)直方圖是一維數(shù)據(jù)用得zui多的圖形,可用來(lái)進(jìn)行定性分析和定量分析。橫坐標(biāo)表示熒光信號(hào)或散射光信號(hào)強(qiáng)度的相對(duì)值,其單位用“道數(shù)”(channel)表示,橫坐標(biāo)可以是線性的,也可以是對(duì)數(shù)的??v坐標(biāo)通常代表細(xì)胞出現(xiàn)的頻率或相對(duì)細(xì)胞數(shù)。下面以研究細(xì)胞周期為例說(shuō)明如何分析單參數(shù)直方圖所表達(dá)的信息。
         

        單參數(shù)直方圖
         

        經(jīng)DNA特異性染料(如P1)染色的細(xì)胞群體,通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)量區(qū)受激光照射后發(fā)出特異性熒光,在一定條件下,熒光強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)的DNA含量成正比,DNA含量高的細(xì)胞發(fā)射的熒光強(qiáng),反之則弱。

        DNA含量與細(xì)胞數(shù)目的關(guān)系,即2N(2倍體)代表GO/G1期細(xì)胞,4N(4倍體)代表G2/M期細(xì)胞,兩者中間代表S期細(xì)胞。這是典型的以2倍體和4倍體細(xì)胞為主的流式DNA圖。通過(guò)上述信息可得到所測(cè)細(xì)胞群

        中增殖細(xì)胞的數(shù)量。

         

        2.  二維點(diǎn)圖單參數(shù)直方圖只能表明一個(gè)參數(shù)與細(xì)胞數(shù)量間的關(guān)系,不能顯示兩個(gè)獨(dú)立參數(shù)與細(xì)胞數(shù)量的關(guān)系。當(dāng)需要研究?jī)蓚€(gè)或更多測(cè)量參數(shù)之間的關(guān)系時(shí),可采用二維點(diǎn)圖。

        二維點(diǎn)圖有兩種形式,橫坐標(biāo)表示前向散射光(FSC),反映細(xì)胞的大??;縱坐標(biāo)表示側(cè)向散射光,反映細(xì)胞內(nèi)顆粒的大小和多少。坐標(biāo)圖上每一點(diǎn)同時(shí)表示具有相應(yīng)坐標(biāo)值的細(xì)抱存在。

        例如,人血白細(xì)胞懸液樣品上機(jī)后,在坐標(biāo)圖上根據(jù)細(xì)胞大小和細(xì)胞內(nèi)顆粒形態(tài)出現(xiàn)三類不同顏色的細(xì)胞群,通過(guò)設(shè)門框把這三類細(xì)胞區(qū)分開,即紅色顯示(P1)淋巴細(xì)胞群,綠色顯示(P2)單核細(xì)胞群,藍(lán)色顯示(P3)中性粒細(xì)胞群。如果欲檢測(cè)其中一種細(xì)胞兩個(gè)獨(dú)立參數(shù)與細(xì)胞數(shù)量之間的關(guān)系,則選定其中一個(gè)門框。

        假設(shè)選定淋巴細(xì)胞(P1),即可對(duì)其兩種不同熒光素標(biāo)記的細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行分析,出現(xiàn)第二種形式的二維點(diǎn)圖。橫坐標(biāo)為PerCP-Cy5熒光標(biāo)記的CD3細(xì)胞數(shù)目(熒光道數(shù)),縱坐標(biāo)為FITC熒光標(biāo)記的CD4細(xì)胞數(shù)目(熒光道數(shù))。

        因此,左上象限(Q1)代表CD4―細(xì)胞百分比,右上象限(Q2)代表CD4+/CD3-細(xì)胞百分比,左下象限(Q3)代表CD4―/CD3―細(xì)胞百分比,右下象限(Q4)代表CD3―細(xì)胞百分比。由此得知,在CD3+淋巴細(xì)胞中CD4―淋巴細(xì)胞所占的百分比。
         

         雙指標(biāo)二維點(diǎn)囤的細(xì)胞群框定            熒光雙染色二維點(diǎn)圖

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