甲基化特異性PCR

DNA

亞硫酸氫鈉、氫醌、石蠟油、乙醇

水浴鍋、PCR儀

1.  在50 μl 體系中，DNA（2~5 μg）經(jīng)NaOH（終濃度值0.2 mol/L）在37℃變性10 Min。

2.  對(duì)于ng級(jí)別的人基因組DNA，在進(jìn)行修飾前加入2μg蛙魚(yú)精DNA為載體。

3.  加入30 μl 剛配制好的10 mmo/L 氫醌與520/1的40.5%亞硫酸氫鈉混勻。

4.  然后用石蠟油隔絕空氣的條件下，避光在50%溫育16 h。

5.  修飾后的DNA過(guò)WizerdDNA純化柱，用50/1 L 水洗脫。

6.  室溫下用NaOH（終濃度為0.3 mol/L）修飾5 min，之后用乙醇沉淀。

7.  DNA溶于20 μl 水中，立即使用或在-20℃保存。