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1.將水浴鍋預熱至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
（二）取出凍存管：
1.根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
2.從液氮罐中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。
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1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內(nèi)。
?。ㄋ模┢胶怆x心：
細胞用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min 離心3min
（五）制備細胞懸液：
1.吸棄上清液。
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細胞懸液。
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細胞濃度以5×105/ml為宜。
?。ㄆ撸┡囵B(yǎng)細胞
將復合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時（或者24-48小時）后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時間由細胞情況而定。
初學者易犯錯誤：
1水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。
2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導致傳熱不佳，使融化時間延長。
3.離心前忘記平衡，導致離心機損壞和細胞丟失。
4.一次復蘇細胞過多，忘記更換吸頭和吸管，導致細胞交叉污染。
