強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰型變寬、拖尾，使柱效下降，同時(shí)也會引起保留時(shí)間的變化，累積到一定程度時(shí)還會導(dǎo)致柱壓升高。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個(gè)累積效應(yīng)，需要一定的時(shí)間才會體現(xiàn)出來，但對許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言，很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì)，因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積，需要在每天的日常維護(hù)中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。

　　清洗方法：

　　1、未使用緩沖鹽：每天分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后再用甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min。

　　2、使用過緩沖鹽：分析完成后，先用上述方法除去緩沖鹽，然后在用純甲醇或乙氰反向沖洗色譜柱60min

　　3、補(bǔ)救方法：

　　水——乙氰——lv仿（或異丙醇）——乙氰——水

　　每一步以1.0ml/min流速反向沖洗色譜柱60min。

　　色譜柱的使用壽命，除了與所分析的樣品和流動相及使用頻率有關(guān)系外，主要的是與日常維護(hù)有關(guān)。色譜柱的使用壽命主要是柱效和柱壓兩個(gè)指標(biāo)來衡量，如果一支色譜柱柱效太低或柱壓太高，通常被認(rèn)為該色譜柱已經(jīng)報(bào)廢。因此，延長色譜柱使用壽命的關(guān)鍵是，消除引起柱效下降和柱壓升高的因素。日常維護(hù)注意事項(xiàng)：

　?。?）流動相的PH值應(yīng)有使用范圍內(nèi)

　　由于流動相的PH 控制不當(dāng)而對色譜柱造成的損害，通常很難是色譜柱恢復(fù)，因此必須認(rèn)真對待，嚴(yán)格控制流動相的PH值。

　?。?）去除樣品和流動相中的固體顆粒

　　樣品和流動相中含有的固體顆粒物質(zhì)會堵塞色譜柱篩板，篩板被堵住不僅會引起柱壓的升高，而且也會引起柱效下降，因?yàn)楹Y板的堵塞會引起液流不均，導(dǎo)致色譜峰型拖尾、變寬，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水和色譜純試劑，在分析樣品前對樣品進(jìn)行針筒過濾，流動相過0.45μm濾膜。

　　（3）使用保護(hù)柱或在線過濾器

　　樣品和流動相經(jīng)過濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì)，因?yàn)楸玫哪p、密封圈和管路的老化也會產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì)，這些固體顆粒被流動相帶入色譜柱，堵塞篩板，導(dǎo)致柱壓升高、柱效下降。保護(hù)柱和在線過濾器上都有篩板，其孔徑與色譜柱孔徑相同，因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達(dá)色譜柱，有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于色譜柱柱壓升高在分析故障中占很大 比例，因此，除對樣品和流動相進(jìn)行過濾外，建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護(hù)柱或在線過濾器。

　?。?）正確使用緩沖鹽

　　緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑，因此緩沖鹽使用不當(dāng)會使其析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結(jié)，柱壓上升；同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話：使用前要過濾，使用后要沖洗。具體方法如下：

　　1）等度條件：使用緩沖鹽前和使用后需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min；使用后去除緩沖鹽的另一個(gè)方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗色譜柱過夜。

　　2）梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗60min，再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱120min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。

　?。?）防止強(qiáng)保留物質(zhì)在色譜柱上存留

　　強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積，對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為，不僅引起峰型變寬、拖尾，使柱效下降，同時(shí)也會引起保留時(shí)間的變化，累積到一定程度時(shí)還會導(dǎo)致柱壓升高。由于強(qiáng)保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個(gè)累積效應(yīng)，需要一定的時(shí)間才會體現(xiàn)出來，但對許多藥品特別是復(fù)雜樣品而言，很難判斷其是否是含有強(qiáng)保留物質(zhì)，因此要防止強(qiáng)保留物質(zhì)的累積，色譜柱需要在每天的日常維護(hù)中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。